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用途：
液相色譜法只要求樣品能制成溶液
,
不受樣品揮發(fā)性的限制
,
流動(dòng)相可選擇的范圍寬
,
固定相的種類(lèi)繁多
,
因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、
離解的和非離解的以及各種分子
量范圍的物質(zhì)。
與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，
HPL
C
所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測(cè)定
性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，
能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。
隨著固定相的發(fā)展
,
有
可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于
HPL
C
具有高分辨率、高靈敏
度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用
,
流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)
,
因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食
品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用
是一個(gè)重要的發(fā)展方向。
3.
測(cè)定原理
液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。
儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，
樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相
,
被流動(dòng)相載入色譜柱
(
固定相
)
內(nèi)
,
由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)
,
在兩相中作相對(duì)運(yùn)
動(dòng)時(shí)
,
經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附
-
解吸的分配過(guò)程
,
各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別
,
被
分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出
,
通過(guò)檢測(cè)器時(shí)
,
樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄
儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
液相色譜法用途
液相色譜法只要求樣品能制成溶液, 不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類(lèi)繁多,因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。 與試樣預(yù)處理技術(shù)相配合，HPL C 所達(dá)到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測(cè)定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復(fù)雜相體中的微量成分。隨著固定相的發(fā)展, 有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離。由于HPL C具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復(fù)利用, 流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應(yīng)用到生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機(jī)分析等各種領(lǐng)域。液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。
液相色譜法測(cè)定原理
液相色譜儀的系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相) 內(nèi), 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù), 在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí), 經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附- 解吸的分配過(guò)程, 各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別, 被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出, 通過(guò)檢測(cè)器時(shí), 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
液相色譜法注意事項(xiàng)
1.使用”保護(hù)柱”，能夠延長(zhǎng)色譜柱的使用壽命。簡(jiǎn)單的說(shuō)，”保護(hù)柱”即是很短的色譜柱，填裝和所使用液相色譜柱相同的填料。正確使用裝在液相色譜柱前面的”保護(hù)柱”，可以阻攔一些容易損壞液相色譜柱的物質(zhì)。而達(dá)到延長(zhǎng)柱子壽命的效果。如果使用”保護(hù)柱”不當(dāng)。會(huì)造成反效果。因?yàn)樵诒Ｗo(hù)柱使用過(guò)程中。如污染達(dá)到一定程度而沒(méi)有及時(shí)更換，累積的雜物很可能會(huì)沖入色譜柱中，反而會(huì)造成色譜柱損壞。因此。使用”保護(hù)柱”時(shí)，重要的是要知道什幺時(shí)候該換保護(hù)柱。該換的時(shí)候就必須要立即更換。
2.選擇高品質(zhì)的柱子，并注意使用方法；可以延長(zhǎng)柱子的使用壽命。一般認(rèn)為同一廠牌、同一型號(hào)的柱子之間的品質(zhì)都相同，對(duì)品質(zhì)管理很?chē)?yán)格的廠家而言，這說(shuō)法是成立的。但如果廠家品質(zhì)管理不夠嚴(yán)格，即使是同一批號(hào)的新柱子之間的品質(zhì)也有差異。所以，選用柱子時(shí)必須選擇管理嚴(yán)格的高品質(zhì)柱子，我們知道，任何柱子使用過(guò)后都會(huì)產(chǎn)生變化。尤其如在強(qiáng)酸或強(qiáng)堿條件下使用，柱子更易產(chǎn)生變化。因此，應(yīng)盡量選用pH適用范圍大的柱子。在開(kāi)發(fā)新分析方法時(shí)，許多專(zhuān)家建議不要使用舊柱子。因柱子一經(jīng)使用。柱性會(huì)改變；如此一來(lái)，使用舊柱子開(kāi)發(fā)出來(lái)的新分析方法，很可能在再使用同廠牌的新柱子分析時(shí)。發(fā)生無(wú)法達(dá)到預(yù)定效果的情況?？偟恼f(shuō)。開(kāi)發(fā)新分析方法時(shí)要使用品質(zhì)好的新柱子；并且一支柱子好使用在一種分析方法上；則柱子壽命可以延長(zhǎng)。
3.定期沖洗柱子可以延長(zhǎng)柱子使用壽命。我們知道柱子使用一段時(shí)間后總會(huì)有一些雜質(zhì)累積在柱內(nèi)。這些雜質(zhì)不會(huì)隨著流動(dòng)相出來(lái)，自然會(huì)逐漸影響柱子的品質(zhì)。這些雜質(zhì)在后來(lái)的分析譜圖上出現(xiàn)。而造成出現(xiàn)怪峰、基線不平等現(xiàn)象。簡(jiǎn)單的解決方法是用較強(qiáng)的流動(dòng)相沖洗。好是在每次分析某一產(chǎn)品完成后沖洗。如果分析時(shí)使用緩沖劑時(shí)﹐好用水來(lái)取代緩沖劑。先使用有機(jī)和水的混合溶液為流動(dòng)相沖洗緩沖劑。接著再用100%有機(jī)溶劑沖洗。如果不先用有機(jī)和水的混合溶液沖洗，而直接用100%有機(jī)溶劑沖洗的話，緩沖劑很可能會(huì)沉淀出來(lái)，而損壞柱子的品質(zhì)。使用10-20倍柱體積的量來(lái)沖洗基本就足夠了。專(zhuān)家建議好將100%有機(jī)溶劑沖洗的條件加在分析實(shí)驗(yàn)程序完畢地后，如此一來(lái)每天在開(kāi)機(jī)前都會(huì)用100%機(jī)溶劑沖洗。一般硅膠柱可以反沖洗處理﹐即是在將沖洗前將柱子倒反接后再?zèng)_洗。打算使用反沖洗處理前，好先參考柱子的保養(yǎng)說(shuō)明書(shū)。所以要真正保護(hù)柱子，使柱子的壽命延長(zhǎng)，好是使用”保護(hù)柱”和定期沖洗柱子
